Introducción a la Citometría de Flujo (II)

Aquí tenéis otro interesante documento pdf repasando brevemente los principios de la citometría de flujo, el análisis básico de los datos y a destacar: una serie de los protocolos más utilizados. Ideal para estudiantes y usuarios con poca experiencia pero con muchas ganas de aprender. También en inglés.

Introducción a la Citometría de Flujo

Os adjunto un link para que podáis descargar un manual de introducción a la citometría de flujo: Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide. Está en inglés, como la mayoría de documentación en este tema. Cabe destacar que contiene un cuestionario de autoevaluación para que pongáis a prueba vuestros conocimientos. Muy recomendable para "no iniciados".

Amnis ImageStream®

Me gusta este equipo. Comercializado por Amnis, combina imagen y citometría de flujo. Está equipado con una lámpara de campo brillante (100 W) con emisión entre 430 y 730 nm, un láser azul (488 nm) con una potencia entre 20 y 200 mW, con opciones de láser ultravioleta (375 nm; 10 mW), violeta (405 nm; 180 mW) y rojo (658 nm; 80 mW). El primer canal queda reservado para el campo oscuro, mientras que los restantes -hasta un total de seis- están reservados para el campo brillante y las fluorescencias, permitiendo el uso de fluorocromos como DAPI, Hoechst, AlexaFluor 488, PE, Cy-3, PE-TexasRed, ECD, PerCP, DRAQ5, entre muchos otros. El límite de detección es cercano a los 50 MESF, permitiendo analizar 10,000 células por minuto. El secreto reside en un cámara CCD de gran sensibilidad y velocidad de captura de imágenes. Los resultados son espectaculares.

FACSAria

Para muchos, el último estado de la citometría en separadores celulares. Para unos pocos entre los que yo mismo me incluyo, el separador celular "utópico". Evidentemente un separador celular no funciona sin operario, y menos el FACSAria. Y tampoco es a la separación celular lo que ha supuesto el FACScan a la citometría de flujo. Permite detectar hasta 13 fluorescencias de un total de 15 parámetros. Es completamente digital, permitiendo velocidades de adquisición de muestras de hasta 70,000 eventos por segundo. Incorpora láseres de estado sólido de 407, 488 y 633 nm y más recientemente y siempre bajo petición exclusiva del usuario, un láser ultravioleta permitiendo la excitación a 355 nm. La sensibilidad es de 150 MESF para la fluoresceína y la ficoeritrina. Lo mejor: su reducido tamaño y su innovador sistema óptico en octógono. Lo peor: la limitación de embocaduras ("nozzle tips") a 70 y 100 micras y su escasa modularidad.

FLOWJO

Este avanzado software (FlowJo) viene a se como la navaja suiza de los programas destinados al análisis de datos obtenidos mediante citometría de flujo, quizás por contener "casi" todas las herramientas necesarias para cualquier tipo de análisis de datos. Corre tanto en Mac como en PC, y quizás una de sus más poderosas aplicaciones resida en el análisis de múltiples archivos, es decir, por lotes (batch processing). Además de proporcionar información sobre el fenotipo de las células, permite utilizar diferentes plataformas para el estudio del ciclo celular, cinéticas (p.e. de calcio intracelular), proliferación (CFSE), la comparación estadística de diferentes muestras, calibración y cuantificación (p.e. de la densidad antigénica) y por supuesto de la compensación del color. Inconvenientes: no es gratuito. Pero si puedes, cómpralo para tu laboratorio.

MoFlo™

El separador celular más denostado por la mayoría de "competidores". Hablamos del MoFlo ("Modular Flow Cytometer"). Permite recuperaciones celulares muy elevadas sin comprometer la viabilidad y la función celular incluso trabajando a 60 psi de sheath e incorpora el sistema más preciso para deposición de una única célula en placas multipocillo. Gracias a su completa modularidad, es totalmente compatible con todo tipo de actualizaciones futuras. Lo más impresionante, la estabilidad del sistema fluídico, permitiendo largos procedimientos ininterrumpidos de separación celular.

BD Flow Cytometers

Interesante vídeo (en inglés) introductorio a algunos de los citómetros de flujo comercializados por BD (Becton, Dickinson and Company), el FACScan, el FACSCalibur, el LSR-II (mi citómetro favorito de BD) y el separador celular FACS DiVa. También iremos hablando detalladamente de cada uno de estos instrumentos.